DOI:10.1016/j.ejpb.2020.05.025
伤口愈合是一个复杂且代价高的公共卫生问题，应及时解决，以实现快速、充分的组织修复，从而避免甚至消除潜在的病原体感染。慢性感染的不愈合伤口代表了医疗保健系统的一个严重问题。对于慢性不愈合伤口的治疗，仍然需要具有最佳疗效和最高安全边际的高效伤口敷料和量身定制的治疗方法。新型伤口敷料的使用已经成为满足这些要求的一种有前途的工具。在这项工作中，用含天然抗菌化合物百里香酚（THY）的电喷射聚乳酸-乙醇酸微粒（PLGA MPs）装饰不对称电纺聚己内酯（PCL）基纳米纤维（NFs），以制备具有缓释作用的药物洗脱抗菌敷料。合成的敷料成功地抑制了金黄色葡萄球菌ATCC 25923的体外生长，并且在治疗24小时后，在相同剂量下对人真皮成纤维细胞和角质形成细胞培养物也显示出细胞相容性，而使用游离百里酚时未观察到。建立小鼠切除伤口夹板模型，然后用金黄色葡萄球菌对伤口进行实验性感染并用合成敷料进行处理，结果表明，7天后伤口中细菌的负载量减少，尽管没有完全消除感染。研究结果表明敷料和细菌直接接触的相关性，强调需要考虑伤口表面和所含抗菌药物的性质来调整其设计。
图1.THY负载PLGA微粒的合成优化。A）5％THY，0.5 mL/h；B）7.5％THY，0.5mL/h；C）10％THY，0.5 mL/h；D）15％THY，0.5mL/h；E）10％THY，1.0 mL/h；F）图像E的微粒直方图（N=100）。
图2.随着时间的流逝，微粒在电纺PCL纳米纤维上的附着情况：A-D）分别为微粒电喷雾0.5、1、1.5和2小时后的纳米纤维表面；E）在微粒电喷雾2小时后的电纺PCL纳米纤维的顶视图；F）微粒电喷雾2小时后，垫子的底面。N=100。
图3.PCL NFs@PLGA-THY MPs垫的特性：A-D）在水中超声处理0、6、12和18分钟后，通过机械应力分别评估PLGA MPs和电纺PCL NFs之间的附着；E）通过GC-MS和1H-NMR评估纳米纤维中的PLGA和THY负载（一式两份分析的三个不同样品的平均值±SD）；F）PCL NFs@PLGA-THY MPs中THY的释放曲线。平均值±SD；每个时间点18个数据。
图4.用不同垫子处理1天（A，C，E）和5天（B，D，F）后，抗菌圆盘扩散测试的代表性图像：A，B）PCL NFs；C，D）PCL NFs@PLGA MPs；E，F）PCL NFs@PLGA-THY MPs。比例尺=10 mm。
图5.用合成的垫子（PCL NFs、PCL NFs@PLGA MP和PCL NFs@PLGA-THY MPs）处理24h的人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞（HaCaT）的体外细胞毒性结果，以及24h内从PCL NFs@PLGA-THY MPs垫释放的游离THY（0.52 mg/mL）。从一式两份进行的六个不同实验中获得的平均值和SD（N=12）。
图6.SKH1小鼠体内感染伤口切除模型并用合成材料进行处理：A）体内过程的示意图；B）在手术和感染（INF）后3和7天的伤口演变的代表性图像。插图显示了有关细菌菌落计数（（++）大量菌落，（+++）大量培养物）的微生物学结果；C）微生物qPCR结果。数据表示为一式三份的三个独立实验的平均值±SD。7天后，INF组与治疗组之间存在显著性差异（*p≤0.05）。
图7.伤口感染的组织病理学评估和苏木精-伊红染色（10倍）。对照组（A，B）、感染组（C，D）、PCL NFs@PLGA MPs治疗组（E，F）和PCL NFs@PLGA-THY MPs治疗组（G，H）在手术和感染后3（A，C，E，G）和7（B，D，F，H）天的代表性图像。对照动物在伤口的周围没有反应（A）或肉芽组织的形成，这是无菌伤口修复的特征（B）。与对照组相比，感染组或两个治疗组在3至7天之间显示出相似严重程度的炎症反应。通常在7dpi时观察到较高程度的纤维化和修复（箭头）。
图8.在感染和处理过的组织样品中，3dpi时伤口周围的皮下组织CD31的免疫组织化学染色（20x）。（A）感染组的代表性图像，血管最少（棕色染色，箭头）。（B）PCL NFs@PLGA-THY MPs治疗组，多且丰富的血管（棕色染色，箭头）。
