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葡萄糖交联明胶/玉米醇溶蛋白纳米纤维支架用于颅骨骨缺损再生的体内外评价

2019-12-25   易丝帮

DOI: 10.1002/jbm.b.34498

这项研究的目的是评估葡萄糖交联的明胶/玉米醇溶蛋白支架在体外和体内的骨再生。纳米纤维支架在沉积了磷酸十八钙和磷酸二钙的高浓度模拟体液中表现出快速的矿化作用。在CCK-8测试中,纳米纤维支架对MC3T3e1细胞没有细胞毒性作用。此外,扫描电子显微镜和共聚焦激光扫描显微镜图像显示,所有支架都具有生物相容性,并显示出对MC3T3e1细胞良好的支持作用。在成骨特征中,茜素红染色实验表明交联支架上钙沉积有所改善,而碱性磷酸酶的活性没有差异。此外,体内颅骨再生结果表明,交联的明胶/玉米醇溶蛋白支架对颅骨再生具有很强的积极作用,增加了新的骨量和结缔组织的形成,但玉米醇溶蛋白掺入明胶支架不利于骨骼再生。此外,如较高水平的IFN-γ和较低水平的IL-6所示,交联的明胶支架延迟了骨吸收,从而限制了破骨细胞的分化。


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图1颅骨缺损的手术程序:(a)MGZ10,MGZ11和MGZ13支架的照片(从左到右);(b)产生5毫米的缺陷;(c)将支架放入缺损处;(d)骨膜和头皮闭合


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图2矿化前后不同浸泡时间的交联支架的形态:(a)×5000倍和(b)×200倍


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图3分别矿化1、2和3小时后的交联支架的FTIR光谱


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图4浸泡3小时后的矿化支架的XRD曲线


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图5(a)在交联的支架和TCP上的MC3T3e1细胞的CCK-8结果;(b)1天后,支架上的MC3T3e1细胞和TCP的放大200倍的SEM图像;(c)1天和3天后,支架上的MC3T3e1细胞和TCP的CLSM图像。值代表平均值±标准偏差(n=6)。通过Tukey检验,没有相同字母的数据存在显著差异(p <0.05)


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图6(a)细胞培养7天后茜素红染色的光学图像。(b)细胞培养7和14天后茜素红染色的半定量结果;(c)在支架和TCP上培养4、7和14天后细胞的ALP活性。值代表平均值±标准偏差(n=6)。通过Tukey检验,没有相同字母的数据存在显著差异(p <0.05)


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图7(a)颅骨缺损部位的宏观图像;(b)8周后颅骨缺损部位的显微CT图像;(c)新形成的颅骨缺损骨量。值代表平均值±标准偏差(n=5)。通过Tukey检验,没有相同字母的数据存在显著差异(p <0.05)


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图8 8周后颅骨缺损的组织学图像:(a)用H&E染色;(b)用Masson 三色染色


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图9(a)TNF-α,(b)IL-1β,(c)IL-6和(d)IFN-γ水平的变化恢复至术前状态(第0周)。数值表示平均值±标准偏差(n=5)。通过Tukey检验,没有相同字母的数据存在显著差异(p <0.05)


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图10炎症细胞因子和成骨细胞之间简化的交互作用示意图。蓝色箭头表示促进差异化。红线表示分化受到抑制。与对照组相比,炎症细胞因子旁边的箭头表示交联明胶支架的水平升高(红色箭头)和降低(绿色箭头)



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